骨缺损除了与令人不快的美学方面相关外，还会影响口腔健康，导致牙周病的发展。最近，再生牙周治疗作为一种新的治疗选择出现，其目的是在以前患病的根表面生长新的组织来修复受损的组织，从而重新建立牙周组织的功能。这可以通过手术植入生物材料来实现，这些生物材料作为上皮细胞的支架，创造一个具有生物学特性的三维环境，为细胞增殖和新组织形成提供理想的环境。

组织工程是利用生物相容性材料实现组织器官再生的新领域。这一原理基于三个支柱:细胞、生物分子和支架。对于脚手架的建造，存在着各种各样的材料，如金属、陶瓷和聚合物。根据其成分的性质，支架可以是天然的或合成的，可以是可吸收的或不可吸收的。在支架中，使用最多的是陶瓷，如磷酸二钙、β-磷酸三钙(β-TCP)和羟基磷灰石(HAp)。后者因其导骨性能、组成和与骨相似而被用于支架构建。然而，HAp的物理稳定性是值得怀疑的，因此减少了在其上施加机械载荷的可能性。因此，有必要用不同的材料对其进行加固，提高其柔韧性和生物降解性。聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)是目前应用最广泛的聚合物之一，它具有降解率高、力学性能好、硬度好、加工性好等特点。

除了支架，生物分子是组织工程的另一个支柱。它们包括细胞粘附肽和有利于细胞增殖的生长因子。此外，血液衍生物如富血小板血浆(PRP)、富血小板纤维蛋白血浆(PRF)和富生长因子血浆也被用于促进组织再生。PRF是一种自体生物材料，富含活性生长因子，可刺激创面瘢痕形成和骨形成。Kapoor等评估了PRF对假体骨整合的影响，证明PRF在植入假体之前疤痕形成的早期阶段有显著影响。其他研究报道了这种生物材料成功用于组织再生，并与聚乙烯醇和海藻酸钠结合，作为支架，增加细胞增殖和矿化。

迄今为止，我们的研究小组已经进行了各种研究，以寻找理想的支架，评估合成和牛HAp以及从蛋壳(HAp-egg shell)中获得的HAp的粒度，纯度和结晶度，它们具有相似的结构。

然而，HAp-egg壳显示出额外的优势，如生态可持续、易得、成本低，这些特性使其成为理想的选择。我们还制作了HAp-egg壳/PLGA支架，用硅增强，并对其成骨细胞活力进行了评估。获得的支架具有高度多孔性和生物相容性，因为它们保留了细胞形态和96%的细胞活力和粘附性。尽管硅在维持细胞活力方面具有优势，但它的溶解度却有所增加。作为这些研究的延续，为了追求牙周再生，我们评估了人牙周韧带成纤维细胞(HPdLF)和成骨细胞在HAp-egg壳/PLGA支架上与PRF结合的细胞活力和粘附性。结果表明，细胞活力和粘附力在支架上增强;然而，支架的物理特性并不理想。

在过去的十年中，胶原蛋白，一种天然来源的细胞外蛋白，被包括在支架构建中，因为它具有生物相容性并有助于与其他材料的结合。最后一个特征在组织再生中是必不可少的，因为它允许细胞分布并帮助组织中的血管生长。

最近的研究报道胶原蛋白支架与羟基磷灰石结合可以改善骨形成，因为它们易于吸收。同样，研究表明，尽管胶原支架的力学性能与其他支架相似，但当胶原支架与HAp等矿物质结合时，可通过成骨和骨免疫调节过程促进细胞增殖。因此，本研究的目的是探讨富含PLGA/PRF的HAp-egg壳胶原支架对PdLF细胞粘附和活力的可能有益作用。我们研究的原假设是，如果使用PLGA/PRF胶原支架与仅由hap -蛋壳和胶原制成的支架相比，PDF细胞粘附没有差异。在本研究中，我们开发了一种含有hap -卵壳/PLGA/PRF/Col的支架，利用每种材料的优势，提高HPdLF细胞的活力和粘附性，为牙周再生提供可能的新选择。

方法:采用四种不同的HAp-egg shell对HPdLF进行24 h的种子培养，通过活/死实验评估细胞活力:(1)(HAp-egg shell/PLGA)， (2) (HAp-egg shell/PLGA +胶原)，(3)(HAp-egg shell/PLGA + PRF)和(4)(HAp-egg shell/PLGA + PRF +胶原)。用共聚焦显微镜测定细胞粘附和活力，用集中趋势和分散测量定量;差异有统计学意义(p < 0.05)。

实验过程。(A)人牙周韧带成纤维细胞培养;细胞呈梭形。(B)所有组均采用HAp-egg壳/PLGA支架，呈5mm圆盘状，高度2mm。(C)富血小板纤维蛋白(PRF)，具有凝胶状稠度，这是该生物材料的特征。(D) 96孔板实验设计，含HPdLF培养基。(E)图显示四个评估组:红色(hap -蛋壳/PLGA + HPdLF)，蓝色(hap -蛋壳/PLGA + HPdLF +胶原)，黄色(hap -蛋壳/PLGA + HPdLF + PRF)和绿色(hap -蛋壳/PLGA + HPdLF +胶原+ PRF)

共聚焦荧光显微镜(CFM)下捕获的图像;N = 3 (i, ii, iii)。(A). HAp-egg shell/PLGA + HPdLF。(B). HAp-egg shell/PLGA + HPdLF + Collagen。(C). HAp-egg shell/PLGA + HPdLF + PRF。(D). HAp-egg shell/PLGA + HPdLF + PRF + Collagen。活细胞是绿色的，死细胞是红色的。

各组细胞粘附力(A)和活力(B)的比较。均数±标准差。

结果:1组细胞活力和黏附较低(3.70 ~ 10.17%);2、3组细胞活力高，细胞黏附率低(2组59.2 ~ 11.1%，3组58 ~ 4.6%);第4组细胞活力最高(82.8%)，细胞粘附中等(45%)(p = 0.474)。

结论:胶原对HAp-egg壳/PLGA支架复合PRF的影响有利于HPdLF细胞的粘附和活力，在临床上对骨缺损的修复和牙周韧带组织的再生具有积极作用。

原始出处： 

Leonor C, Espitia-Quiroz;  Andrés L, Fernández-Orjuela;  Lina M, Anaya-Sampayo; Viability and Adhesion of Periodontal Ligament Fibroblasts on a Hydroxyapatite Scaffold Combined with Collagen, Polylactic Acid-Polyglycolic Acid Copolymer and Platelet-Rich Fibrin: A Preclinical Pilot Study.Dent J (Basel) 2022 Sep 6;10(9)